保持手术间“相对密闭状态”，保证空气的洁净度：应保持层流手术室物品相对固定，尽量减少工作人员进出次数。常规用的手术耗材、液体、药品等均在层流手术室的玻璃墙柜中分类放齐、放全，位置相对固定，保持基数；把与手术相关的各种仪器如电刀、显微镜、腹腔镜等固定在手术间，各类物品分类、分规格摆放，标识清楚，使物各有位、过目知数、一目了然。 每天专人负责检查及添置室内物品并登记；手术人员及参观者进入手术室后，尽量减少走动，各项动作要轻柔，勿在手术室抖动各种敷料。手术过程中保持前后门关闭，以避免频繁开关时空气流动污染；尽量避免一位巡回护士同时巡回多台手术，保证手术间处于相对封闭状态。

强化清洁管理，减少各种污染的机会：层流手术室的一切清洁工作必须采用湿拭打扫，在净化空调系统运行中进行。每天早晨湿拭并用消毒液擦拭手术室的物品，湿拭拖地并用消毒液擦洗墙面。层流手术室地面保持整洁，术中如有血液、体液溅到仪器或地面，及时用浸湿消毒液的抹布擦拭；手术间设有尖锐物收集箱、感染类垃圾收集袋及非感染性垃圾收集袋，术中产生的垃圾分类放置，术后集中处理，每台手术结束后器械护士将污染敷料置于污物车内，由工人从污物通道运出，减少对地面的污染，减少污物在室间停留时间；每次手术完毕用消毒液擦拭手术间的无影灯、器械台、手术床、床垫和体位垫及其他物品表面，并用消毒液湿拭清洁地面。每周进行彻底的清洁工作，不同级别的层流手术室使用各自专用的拖把以防止交叉感染，并用500 mg/L的含氯消毒剂浸泡消毒。每星期清洗初效过滤网1次，出风口1次，并用消毒液擦拭回风口过滤网。中效、高效过滤网每2年更换1次。 塑胶地板定期请清洁公司用专业单圆机清洗加打蜡。每月对洁净手术室内空气洁净度和物体表面进行细菌监测。

加强出入口的管理：在层流手术室大门及无菌区入口处铺设易清洗且可用消毒液浸泡的地垫，每日更换，这将对进出的推车及其车轮起到除尘和消毒作用。设立交换厅，严格区分室内车、室外车，病人由病人通道入室，进出必须更换交换车。每日增加交换区清洁地面的次数。